Kā padarīt barības vielu agaru Petri trauciņos

Video: How to make HOMEMADE PETRI DISHES (NUTRIENT AGAR)

Saturs

Instrukcijas
Kā
Kas jums nepieciešams

Barības vielu buljonu izmanto baktēriju, piemēram, Escherichia coli, audzēšanai. Šīs buljona receptes atšķiras atkarībā no baktēriju sugas, kā arī ģenētisko modifikāciju klātbūtnes, piemēram, rezistence pret antibiotikām. Buljonu var sacietēt, pievienojot agara agaru, kas ļauj baktērijām veidot atšķirīgas kolonijas, bet šķidrā kultūrā tās vienkārši izkliedējas visā tilpumā. Tā ir pamata metode, bet būtiska progresīvām metodēm, piemēram, gēnu klonēšanai vai mikrobioloģiskām analīzēm. Šajā rakstā pieņemts, ka Escherichia coli laboratorijas celmi tiks audzēti Luria buljona agara plāksnēs (vai Petri trauciņos).

Instrukcijas

Petri plāksnes (Jupiterimages / Comstock / Getty Images)

Izmēra 10 g baktēriju triptona, 5 gramus rauga ekstrakta, 5 gramus nātrija hlorīda, 15 gramus agara vai agarozes un 1 ml 1 N nātrija hidroksīda. Samaisa tos ar sterilu, autoklāvētu destilēta ūdens tilpumu, līdz iegūst 1 litru barotnes. Autoklāvējiet barotni pudelēs vai daļēji noslēgtās kolbās 25 minūtes. Pirms reaģentu pievienošanas, ko var iznīcināt ar augstu siltumu, piemēram, antibiotikām vai citiem uztura bagātinātājiem, ļaujiet tai atdzist līdz aptuveni 50 ° C.
Ļauj autoklāvētai videi atdzist līdz 50 ° C un ne mazāk kā 45 ° C, jo agars pirms ielešanas piestiprinās pie konteinera. Iegūstiet sterilus Petri trauciņus un ieliet pietiekami, lai segtu visu virsmas laukumu un vismaz pusi no to dziļuma. Izvairieties no pārpildīšanas, un, vēlams, neļaujiet agaram sasniegt plāksnes augšējo malu. Pagaidiet cietināšanu sterilā vidē (piemēram, ar lamināru plūsmas kameru), atstājot vākus atvērtus un vienu pārsega stūri.
Žāvējiet plāksnes. Lai gan tos var izmantot, tiklīdz tie ir cieti, agara virsmā būs mitrs mitrums, kas novērsīs baktēriju koloniju adhēziju. Tāpēc ir labāk žāvēt plāksnes pirms baktēriju uzklāšanas, piemēram, atstājot tās istabas temperatūrā dažas dienas vai pusstundu ar lamināru plūsmas kameru vai 37 ° C inkubatorā.
Uzglabājiet plāksnes. Žāvētās plāksnes jāapkopo otrādi (apgrieztās) un jāievieto oriģinālajā iepakojumā, jāaizlīmē ar lenti un jāiepako folijā, lai pasargātu tās no gaismas vai piemērotā traukā. Vienmēr uzrakstiet sagatavošanas datumu un izvairieties no lietošanas, ja plāksnes ir vecākas par diviem mēnešiem.

Kā

Veikt tik daudz no iepriekšējām darbībām (vēlams, visas) sterilā vidē (piemēram, ar liesmu vai lamināru plūsmas pārsegu), lai novērstu baktēriju gaisā esošo piesārņotāju iekļūšanu vidē.